DNA를 받아들일 수 있게 된다. 전형적인 경우에 E.coli cell들은 CaCl2로 처리되고 플라스미드 vector와 섞인다. 보통 10000개의 cell들 중에 하나의 cell만이 외부 DNA를 받아 들일 수 있는 competent한 상태가 된다. 각각의 competent cell들은 하나의 플라스미드DNA 분자를 받아들인다. 처리된 cell들이 영양 배지에 plating
DNA 이동을 위한 형질전환이 일어나기 위해서는 수용자 박테리아는 일시적으로 수용 가능한 상태(a stateofcompetence)로 존재해야 하는데 자연계에서는 기아(starvation)나 세포 밀도(cell density)와 같은 환경적 변화로 인해 유도될 수 있고, 혹은 실험실에서 인위적으로 만들 수도 있다.
② 형질 전환 방법
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및 이해를 하고, PCR의 기초적인 간단한 실험을 함으로써 DNA와 유전자를 다루는 molecular biology에서의 이론적 측면뿐만 아니라 실험적인 측면 또한 함양한다.
2. Date
실험기간: 2011년 11월 7일 – 11일, 총 5일
3. Experiment
3.1. Day 1 - 제한효소를 이용한 DNA 절단 및 분석, Ligation
3.1.1. Digestion ofDNA with Restrict
DNA를 정제해야 하는데 이는 DNA를 제외한 RNA나 protein을 제거하는 과정이다. 마지막으로 남은 DNA sample을 농축하는 과정을 거친다. 4단계의 과정을 좀 더 자세히 알아보면 다음과 같다.
a. Bacterial cell 배양물의 증식 및 수확
37℃, LB 배지, 200 rpm shaking incubator에서 E. coli의 doubling time은 20분이고, maximum densi