2. 제한효소(restriction enzyme)에 의한 유전자의 분리
유전자 클로닝은 DNA분자를 아주 정확하고 반복적으로 절단할 것을 요구한다. 각 Vector 분자의 circle을 열어서 새로운 DNA가 삽입될 수 있도록 각 분자마다 하나의 같은 위치가 절단되어야 한다. DNA를 자른다는 것은 nucleotides를 연결하고 있는 phosphodiester b
제한효소에 의해 잘린 DNA들을 분리한다.
2. Principle
1) agarose gel electrophoresis 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
a. DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
b. Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.
c. DNA 형태에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA > linear DNA > open circular DNA
d. 전압
1. Object
제한효소 활용 및 Ligation, 전기영동, plasmid prep. 등의 여러 실험을 통해 Gene cloning의 전반적인 실험 및 이해를 하고, PCR의 기초적인 간단한 실험을 함으로써 DNA와 유전자를 다루는 molecular biology에서의 이론적 측면뿐만 아니라 실험적인 측면 또한 함양한다.
2. Date
실험기간: 2011년 11월 7일 –
분자 전체의 0.01%에 불과하다. 게다가 10,000형질전환체는 수용세포 배양물에 존재하는 전체 세포 수의 매우 작은 비율이다. 따라서 플라스미드를 uptake한 세포를 구별해야 할 필요가 있다. 이를 위해 선별 마커(selectable marker)를 이용한다. Selectable marker란 비형질전환체(non-transformant)가 가지고 있지 않은 새
Experiment 1:
DNA sub-cloning
Purpose
Day 1:
DNA sub-cloning의 1단계: 원하는 유전자를 분리한다.
유전자를 복제하기 위해서는 우선 bacterial cell로부터 DNA를 분리해내고, 그로부터 원하는 유전자를 잘라내야 한다. 이와 같이 이 실험에서는 DNA sub-cloning의 첫 단계로서 원하는 유전자를 분리해내는 단계를 수행