1. 제한효소
DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction
1. 제한효소
DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction
Alkaline lysis method
- 세포의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 방법
- Chromosomal DNA 와 plasmid의 고유한 형태 구조 차이를 이용 !
; Chromosomal DNA - 상대적으로 size가 크고, double heilx
Plasmid - size가 작고, supercoiled 형태 -> pH에 변화에 의한 변성↓
Alkaline Lysis Method
DNA gel electrophoresis(전기영동)
- DN
2. 제한효소(restriction enzyme)에 의한 유전자의 분리
유전자 클로닝은 DNA분자를 아주 정확하고 반복적으로 절단할 것을 요구한다. 각 Vector 분자의 circle을 열어서 새로운 DNA가 삽입될 수 있도록 각 분자마다 하나의 같은 위치가 절단되어야 한다. DNA를 자른다는 것은 nucleotides를 연결하고 있는 phosphodiester b
Restriction endonuclease는 무엇인가?
1. 특이적으로 restriction endonuclease 인식 부위에 근접한 곳이나 내부를 절단하는 것
2. nucleolytic activity를 위해 ATP 가수분해를 필요로 하지 않는다는 것
(중략)
각각의 core는
α-helices에 의해 접혀
5가닥으로 혼합된 β-sheet로 구성
4가지의 단백질이
촉매
restrictive environments around her.
Townspeople don’t think Homer Barron as a suitable marriage partner for Emily because of her noblesse.
At first we were glad that Miss Emily would have an interest, because the ladies all said, "Of course a Grierson would not think seriously of a Northerner, a day laborer." But there were still others, older people, who said that even gri
1. Date
Day 1 – 2008년 10월 27일 월요일
2. Subject & Purpose
Digestion of DNA with Restriction Enzyme & Agarose Gel Electrophoresis & Gel Purification
Plasmid pET vector와 FabG gene이 insert된 pET vector를 두 가지 제한효소, BamHⅠ과 NdeⅠ으로 자른 다음 전기영동을 통해 결과를 확인하고 Purification을 한다.
3. Principle
1) Restriction enzy
Subject : DNA sub-cloning을 위해 원하는 유전자를 분리한다.
Purpose: DNA sub-cloning에 사용할 원하는 유전자를 만들기 위해 plasmid(vector)내에 restriction enzyme을 사용하여 DNA를 자르고 원하는 유전자를 삽입한 후, 목적하는 유전자가 정확하게 cloning되었는지 DNA 전기영동 결과를 분석하여 확인할 수 있
Restriction Enzyme
I. Apparatus
- Water bath, brief centrifuge
II. Reagents
- Plasmid, DDW, restriction enzymes [NdeI, BamHI], restriction enzyme reaction buffer
① NdeI: an endonuclease isolated from Neisseria denitrificans. In molecular biology, it is commonly used as a restriction enzyme.
② BamHI: a restriction enzyme, derived from Bacillus amyloliquefaciens. It has the recognition
◆실험 첫째날 2011년 10월 24일 월요일
▶원리
1 Restriction enzyme 처리
- 이 실험에서 우리는 아무 처리되지 않은 plasmid와 foreign gene을 plasmid에 삽입하여 만든 inserted plasmid에 각각 제한효소를 처리하는 실험을 했다.
- 제한효소란 DNA의 특정한 염기서열을 인식하고 인식부위 또는 그 근처의 특정 이중사