1. 제한효소DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction
1. 제한효소DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction
1.실험 목적
- 분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기 영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
2. 실험 원리
1) 제한효소 (Restriction enzyme)
(1) 제한효소의 정의
* 제
1.실험 목적
- 분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기 영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
2. 실험 원리
1) 제한효소 (Restriction enzyme)
(1) 제한효소의 정의
* 제
2. 제한효소(restriction enzyme)에 의한 유전자의 분리
유전자 클로닝은 DNA분자를 아주 정확하고 반복적으로 절단할 것을 요구한다. 각 Vector 분자의 circle을 열어서 새로운 DNA가 삽입될 수 있도록 각 분자마다 하나의 같은 위치가 절단되어야 한다. DNA를 자른다는 것은 nucleotides를 연결하고 있는 phosphodiester b
1. DNA를 자른다는 것은 nucleotide를 연결하고 있는 phosphodiester bond를 끊어여러 DNA 단편을 만들어 내는 것을 의미한다. 이 때, 이런 역할을 하는 효소를nuclease라고 하며 그 종류로는 바깥 쪽을 절단하는 효소인 exonuclease와 안쪽을 절단하는 endonuclease가 있다.
2. 대표적 endonuclease인 제한효소(restriction enzyme)는
DNA와 유전자를 다루는 molecular biology에서의 이론적 측면뿐만 아니라 실험적인 측면 또한 함양한다.
2. Date
실험기간: 2011년 11월 7일 – 11일, 총 5일
3. Experiment
3.1. Day 1 - 제한효소를 이용한 DNA 절단 및 분석, Ligation
3.1.1. Digestion of DNA with Restriction Enzyme
I. Apparatus
- Water bath, brief centrifuge
II. Reagents
DNA를 자르고 붙이고 변형시켜서 실험에 필요한 재조합 DNA (recombinant DNA)를 제조하고 Southern, Northern, cell culture 실험 등에서 사용해야 할 생체 내 유전자를 얻을 수 있을 뿐 아니라 기본적인 효소의 처리와 DNA의 분리 및 조작방법을 배울 수 있다.
․ Gene cloning의 과정
1) 유전자를 설정하고 그 유전
restriction enzyme을 사용하여 DNA를 자르고 원하는 유전자를 삽입한 후, 목적하는 유전자가 정확하게 cloning되었는지 DNA 전기영동 결과를 분석하여 확인할 수 있다. 그리고 Agarose gel로부터 DNA band를 추출하여 DNA를 추출한다.
Principal:
1) Restriction enzyme
제한효소란, DNA의 특정한 염기배열을 식별하
제한효소는 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있다. 특정한 염기서열을 인식하는 특징 때문에 외부 DNA만 식별해서 잘라낼 수 있다.
Restriction enzyme 처리: Plasmid를 Restriction enzyme 처리하는데 있어서 한가지 Enzyme만 사용하면 자른